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液相色譜因流動相引起的常見問題

更新更新時間:2021-08-16

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                                                     液相色譜因流動相引起的常見問題

                                                          上海連橋生物科技有限公司

一些因流動相引起的常見問題

01

流動相脫氣不充分

流動相受熱,或者流動相不同組分混合時會有氣體產生,氣泡進入泵內引起壓力波動,增加噪音,色譜圖上出現毛刺。可試用下列方法解決問題:流動相再脫氣;采用更有效的脫氣方法或兩種方法配合使用;改系統內混合為系統外預混合。


流動相供給不暢

02

流動相用完,管道中吸入氣體引起泵壓力不穩。應經常觀察儲液器中流動相的量,加足流動相保證所有的樣品分析完畢。輸液管道上裝沉子沉至瓶底,儲液器蓋上留一小孔正好夾住進液管,使其不能上下移動。

過濾器阻塞引起管道和泵腔空化,壓力不穩。過濾器被微粒所阻塞或長霉,去掉過濾器后如果系統運轉正常,說明已找出問題,換上新的過濾器則可。有時候換上新的過濾器仍然不暢,那就需要查查流動相的制備過程,或者換大孔徑的過濾器。不管如何,流動相都需要重新過濾。

流速過高、阻力大,造成空化現象,這是由于過濾器孔徑、管道內徑、流速和溶劑黏度等引起的。如果流速大于10mL/min,常會出現這種現象。


使用下列方法解決:

(1)使用低流速;

(2)換大孔徑的過濾器;

(3)增加進液管道內徑;

(4)抬高或加壓儲液器;

(5)不用過濾器,但流動相一定要先過濾;

(6)儲液器蓋子太緊,在儲液器內形成真空,打出的流動相不連續。應松開蓋子或留有1mm的縫隙;

(7)進液管道阻塞或彎曲使泵抽不到液,注意調整進液管道或更換新的。其它問題包括滲漏或接頭松動、泵部件損壞等,都能引起供液不正常。


03

流動相和儲液器被污染

由于污染,噪音越來越大,檢測器基線上升。污染物可能被泵以穩定的濃度打入系統,而再以穩定的濃度流出來,所以在色譜圖中不出多余的峰。用梯度洗脫時弱流動相可以使污染物聚在柱頂,流動相強度增加后污染物可能被洗脫出來一個大的偽峰。有時基線噪音突然增大或突然提高,都是因為反復加進新的流動相或系統用得太久(通宵)所造成的。新加進的流動相有污染物或者流動相長霉,繁殖了細菌。

臟的儲液器會污染清潔的流動相。每種流動相備有專用的儲液器,或者定期報廢儲液器。


流動相污染來自這幾個方面

04

試劑質量不高,玻璃器皿不合格;

微生物的影響;

配制流動相時操作不當等;

因此要求高純度化學試劑和HPLC級溶劑;

玻璃器皿按規定清洗干凈;

為防止微生物生長,每天要用甲醇清洗系統;

懷疑系統內生長了微生物,可用稀硝酸沖洗即可(注意不要損壞柱和管道系統);

真空脫氣時防止泵油帶入流動相;

用清潔的惰性塞子、攪棒、過濾器和玻璃器皿配制流動相;

已經污染的流動相一定要廢棄掉。

                                                                                                                                  本篇轉載至實驗之家

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